為什么要驗(yàn)證HCP抗體覆蓋率？

在對(duì)工藝中HCP（宿主細(xì)胞蛋白）的監(jiān)控和產(chǎn)品放行中，ELISA一直被用作HCP檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)。這主要是因?yàn)镋LISA可以在mg/ml級(jí)別的產(chǎn)品蛋白中有效地檢測(cè)ng/ml級(jí)別的HCP殘留。并且ELISA的操作簡(jiǎn)便，是經(jīng)典的免疫學(xué)檢測(cè)方法。但ELISA檢測(cè)HCP也有方法的局限性，比如不能從ELISA的結(jié)果中知道樣品中有哪些HCP，或者用于ELISA檢測(cè)的抗體與哪些HCP發(fā)生了免疫反應(yīng)。因此，監(jiān)管部門(mén)要求在使用ELISA檢測(cè)過(guò)程中HCP殘留含量時(shí)，不僅要通過(guò)方法學(xué)驗(yàn)證證明試劑盒的準(zhǔn)確度，精密度，靈敏度等，而且還需要證明使用的HCP抗體有廣泛的反應(yīng)性，即HCP抗體覆蓋率。

AAE是檢測(cè)HCP抗體覆蓋率的更有效方法

2014年，作為過(guò)程污染物殘留檢測(cè)產(chǎn)品領(lǐng)先開(kāi)發(fā)商，Cygnus結(jié)合多年HCP抗體及試劑盒開(kāi)發(fā)經(jīng)驗(yàn)，推出了Affinity Antibody Extraction（AAE）方法驗(yàn)證覆蓋率，突破了傳統(tǒng)2DWB方法驗(yàn)證覆蓋率的局限性，更真實(shí)準(zhǔn)確反應(yīng)HCP抗體覆蓋率。AAE提取富集的樣品和未經(jīng)AAE提取的樣品分別經(jīng)過(guò)2D PAGE分離后使用銀染的方法對(duì)得到的點(diǎn)進(jìn)行匹配、計(jì)數(shù)、計(jì)算覆蓋率。這種方法一經(jīng)上市后，廣泛得到生物制藥企業(yè)和監(jiān)控部門(mén)的認(rèn)可。

AAE+MS更清晰地展示了工藝中HCP殘留情況，進(jìn)一步對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量安全做風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

現(xiàn)階段，常用的HCP抗體覆蓋率驗(yàn)證的方法都存在其自身的局限性。AAE方法解決了傳統(tǒng)2DWB中的低靈敏度和低特異性的問(wèn)題。而且，由于AAE可以在富集本身含量較低的HCP的同時(shí)，還可以大幅降低中間品和終產(chǎn)品中的藥物蛋白。這使對(duì)中間品和終產(chǎn)品中HCP與HCP抗體的反應(yīng)情況的分析成為可能。盡管如此，AAE和銀染分析也不能具體得知樣品中具體有哪些種類(lèi)的HCP，尤其是那些與人體有較高免疫原性和對(duì)藥物有較大影響的HCP?；谝陨蠁?wèn)題的考慮，Cygnus利用更精準(zhǔn)的質(zhì)譜檢測(cè)方法與AAE相結(jié)合，推出了新一代的AAE和Mass Spectrum覆蓋率驗(yàn)證服務(wù)。

AAE與Mass Spectrum可對(duì)上游和下游工藝中的樣品進(jìn)行分析，覆蓋率的結(jié)果更高、更真實(shí)。更主要的是質(zhì)譜可以對(duì)樣品中是否存在潛在高風(fēng)險(xiǎn)的HCP做出鑒定并提供這些蛋白相關(guān)含量，分子量，等電點(diǎn)等信息。無(wú)論是藥物研發(fā)人員，還是監(jiān)管人員都可以對(duì)某個(gè)工藝中HCP殘留情況有清楚的了解，從而做出更好的判斷。

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