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前言
離子交換色譜法是一種重要的生物化學(xué)分離技術(shù),它基于帶電分子與固定相之間的相互作用,廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)分析,使得通過酸堿變體推導(dǎo)蛋白相關(guān)降解途徑成為可能,并為相關(guān)的質(zhì)量控制和分子優(yōu)化提供指導(dǎo)數(shù)據(jù)。而在蛋白質(zhì)分析過程中,離子交換色譜法方法開發(fā)是非常困難的,這受困于每個蛋白的空間結(jié)構(gòu)和氨基酸排列截然不同,這種跳躍式的變化使得每種蛋白擁有不同的等電點(diǎn)與唾液酸或糖基化程度,這大大增加相關(guān)方法開發(fā)的困難程度,此開發(fā)的關(guān)鍵步驟包括多步:選擇合適的離子交換介質(zhì)、優(yōu)化緩沖體系、確定洗脫條件、調(diào)整流速和柱溫等。這些步驟確保了離子交換色譜法在蛋白質(zhì)分析中的有效性和可靠性,但繁瑣的方法開發(fā)步驟也為試驗(yàn)帶來極大的時間成本,間接的增加投入成本,且伴隨著方法開發(fā)失敗的風(fēng)險(xiǎn),這成為蛋白藥物分析領(lǐng)域迫在眉睫的問題。舟帆生物已經(jīng)開發(fā)出關(guān)于離子交換色譜法的通用流動相,并取得了令人鼓舞的進(jìn)展。
由于樣品中各組分的電荷性質(zhì)、大小、形狀和疏水性等都會影響離子交換色譜的過程和結(jié)果,選擇合適的離子交換介質(zhì)和緩沖體系尤為重要。離子強(qiáng)度、pH值、溫度和流速等色譜條件的優(yōu)化需要通過實(shí)驗(yàn)來確定,并且離子交換色譜法中離子強(qiáng)度和pH值的微小變化都可能導(dǎo)致分離效果的顯著差異。在日常配制關(guān)于離子交換色譜法流動相時精確控制這些參數(shù)是實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定和重復(fù)性分離的關(guān)鍵。然而,在實(shí)際操作中,由于緩沖液的制備和使用過程可能會引入誤差,通常導(dǎo)致色譜峰保留時間的遷移等問題。為了解決上述問題,舟帆生物自主開發(fā)并優(yōu)化出了一款用于離子交換色譜法的通用流動相,該產(chǎn)品綜合考慮了分析成本和時間效率,在離子色譜方法開發(fā)過程中兼具了分離效率、分析時間和成本,提供了一種高效、經(jīng)濟(jì)且通用的離子交換色譜流動相的選擇。
材料與方法
儀器、色譜柱
安捷倫1260 高效液相色譜系統(tǒng)
ThermoProPac? WCX-10 HPLC 10μm 4×250mm色譜柱
樣品
實(shí)驗(yàn)中用到的樣品包括8個蛋白藥物樣品均來自合作方浙江大學(xué)藥學(xué)院生物藥制劑與分析團(tuán)隊(duì)。
IEC-HPLC參數(shù)
下表列出了使用ZF-LC-0002流動相A&B(10×)進(jìn)行IEC-HPLC液相分析的色譜參數(shù):
實(shí)驗(yàn)參數(shù)
將8種蛋白稀釋到1mg/mL,并使用CpB酶酶切,酶切后的樣品10000 rmp/min離心十分鐘取上清液進(jìn)樣檢測。
結(jié)果
見圖1。
圖1. 8 種蛋白藥物的IEC-HPLC 色譜圖
結(jié)論
開發(fā)出一種離子交換色譜法通用的流動相,在8種蛋白藥物樣品的分析中使用簡單的洗脫條件即可對蛋白分子的酸性變體和堿性變體達(dá)到較好的分離,為離子交換色譜法相關(guān)的方法開發(fā)提供了一項(xiàng)優(yōu)異選項(xiàng),可以為企業(yè)和相關(guān)研究單位大大縮短方法開發(fā)時間和投入。
產(chǎn)品訂購信息
貨號 |
品名 |
規(guī)格 |
ZF-LC-0002 |
IEC-HPLC通用流動相(10×) |
盒(含A液、B液各1000mL) |
試用申請
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品牌介紹
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